Буферный раствор

pH является важным фактором в работе ионообменной хроматографии, а стабилизация и изменение pH обычно достигаются с помощью буферов, поэтому выбор буфера является важным фактором, влияющим на разделение.

При выборе буфера pH и ионная сила являются двумя ключевыми факторами, влияющими не только на отделение целевого продукта от примесей, но и на выход продукта. Выбранный pH зависит от изоэлектрической точки, стабильности и растворимости целевого продукта не только для того, чтобы превратить разделенный материал в ион, который можно обменивать, но и для поддержания его высокой активности. Следует также учитывать значение pK ионообменника.

Поскольку сам буфер заряжен, его также объединяют со средой для ионообменной хроматографии. Эта комбинация вызовет два вида помех: с одной стороны, снижение концентрации буфера, тем самым снижение буферной емкости; с другой стороны, он обменивается со средой для разделения, конкурируя с белком за обменную емкость среды. Поэтому при использовании сред для анионообменной хроматографии избегайте использования отрицательно заряженных буферов, таких как фосфат. При использовании сред для катионообменной хроматографии избегайте использования положительно заряженных буферов, таких как Трис.

Из-за различных типов разделяющих сред первоначальный процесс немного отличается. В обычных условиях при использовании сред для анионообменной хроматографии исходный буфер выше изоэлектрической точки целевого белка на 0,5-1 pH; с использованием катионообменного слоя. При анализе среды стартовый буфер находится ниже изоэлектрической точки целевого белка на 0,5–1 pH.