Элюирование и регенерация

Когда хроматографическая среда исчерпана, ее следует элюировать. Основной принцип заключается в десорбции целевого продукта более активным ионом или группой. Различные сорбенты различны по своей активности. Поэтому необходимо выбрать подходящий элюент для элюирования белка из хроматографической среды.

Существует примерно три способа элюирования ионообменной хроматографии:
один - одновременное элюирование. Элюент представляет собой разбавленную кислоту, можно использовать раствор щелочи или соли, а также можно использовать соответствующий органический растворитель, при этом в основном используют раствор соли, а лекарственную форму выбирают в соответствии с природой целевого продукта и конечного продукта. выбрано. Поскольку поглощаемое вещество часто не относится к одному виду, заряд каждого вещества различен, а сила связи со средой различна. Даже если используется тот же элюент, легко заменяемое вещество будет вытекать из среды первым, и сила связывания будет велика. После выгрузки материала при его сборе путем фракционирования можно разделить различные вещества и получить относительно чистый продукт. Этот метод часто используется для разделения, когда характеристики целевого продукта хорошо известны, или для разделения аналитических частиц.

Второй представляет собой ступенчатое элюирование, т.е. элюирование раствором соли различной концентрации. Разделительная среда В процессе обменной адсорбции адсорбируются различные белки. Если используются постоянные условия элюирования, иногда невозможно должным образом разделить все компоненты, и необходимо изменить условия элюирования. Это может быть ступенчатое изменение, то есть для поэтапного элюирования используются разные элюенты или элюенты с разными значениями pH, и разные пики элюирования могут быть получены в зависимости от разных концентраций элюентов и разных кислотностей. То есть, при определенной концентрации соли можно получить целевой белок, а при различных концентрациях соли можно получить разные целевые белки. Этот метод поэтапного элюирования подходит для разделения белков известной природы, особенно для масштабного производства, прост в эксплуатации и легко контролируется.

Третий тип — непрерывное градиентное элюирование, то есть изменение ионной силы или pH элюата по определенному линейному изменению (как правило, только в частном случае с использованием метода элюирования, изменяющего pH), в процессе сортировки элюента. При этом разные белки заменяются один за другим с получением различных белковых компонентов, при этом белки, как правило, не являются хвостатыми. Градиентное элюирование является наиболее часто используемым методом элюирования в ионообменной хроматографии, а также методом элюирования с самой сильной элюирующей способностью, который подходит для элюирования аналогичных компонентов со схожими зарядовыми свойствами.

В процессе элюирования можно использовать как прямоточное, так и противоточное элюирование. Прямоточное элюирование также называют прямым элюированием, то есть направление потока элюента совпадает с направлением потока рабочей жидкости, а противоточное элюирование также называют противоточным. При обратном элюировании направление потока элюента противоположно. направлению потока рабочей жидкости. Если сырьевая жидкость обменивается и адсорбируется сверху вниз через обменную колонку, концентрация адсорбата в верхнем слое обменной колонны выше, чем в нижнем слое, и происходит обратная десорбция элюата из снизу вверх может более эффективно достичь цели элюирования. Однако, поскольку операция обратного элюирования намного сложнее прямого элюирования, она в основном основана на положительном элюировании.

Скорость потока элюента также влияет на разделение при ионообменной хроматографии, и скорость элюирования обычно поддерживают постоянной. В целом, разрешение медленного элюирования лучше, чем разрешение быстрого элюирования, но скорость элюирования слишком медленная, что приводит к увеличению времени разделения и побочным эффектам, таким как диффузия образца, расширение пика спектра и снижение разрешения, поэтому это зависит от по фактической ситуации. Выберите подходящую скорость элюирования. Если пики элюирования относительно сконцентрированы в определенной области и вызывают перекрытие, следует соответствующим образом уменьшить диапазон градиента или снизить скорость элюирования, чтобы увеличить разрешение. Если разрешение хорошее, но пик элюирования слишком широкий, скорость элюирования следует соответствующим образом увеличить.