Ni Seplife® 6ff (NTA) Хелатирующая агарозная хроматография смола

Хелатирующая агарозная хроматография смола

Ni Seplife 6ff (NTA)

Ni Seplife® 6ff (NTA) Хелатирующая агарозная хроматографическая смола профиль продукта:

Ni хелатирующая агарозная хроматография  (NTA) - это связывание иминодиациксуальной кислоты на агарозной среде 6ff, а затем хелатируя ион Ni2+  быть как  Аффинные хроматографические средыПолем Это широко используется для  Обработка белка,  нуклеиновая кислота  и  очистка полипептида  в потоке  Биофармирование и биоинженерия.

Ni Seplife® 6ff (NTA) Никелевая хелатирующая агарозная хроматография смола Параметры смолы:

Ni Seplife® 6ff (NTA) Никель хелатирующая агарозная хроматография

1. КОЛОМНАЯ УПАКА
Весь материал и реагент при комнатной температуре, подготовка начального буфера и элюирования.
2. Ориживание
Баланс с объемом 2 ~ 5 слоя начального буферного раствора до тех пор, пока проводимость, рН и другие параметры не изменяются.
3. Пример загрузки
(1) Образец, как правило, растворяется в начальном буфере pH 6-8, а увеличение pH нагрузочного буфера может увеличить нагрузку.
(2) Буфер не должен содержать ЭДТА и цитрат, и лучше всего избегать снижения агентов, таких как Mercaptoethanol и DTT.
(3) Обычно используемый буферный раствор имеет от 10 до 100 ммоль/л раствор фосфатного буфера натрия, от 20 до 200 ммоль/Ltris-HCl раствор буфера.
(4) от 0,15 до 0,5 моль/л NaCl обычно добавляется в буфер для устранения ионного обмена.
(5) При первом использовании гелевого геля хелата хелата рекомендуется использовать 50 ммоль/л PBS (50 ммоль/л NAH2PO4, 0,5 моль/л NaCl, pH 7,4) в качестве начального буфера.
4.elution
Элюция обычно делится на следующие методы:
(1) Уменьшить элюирование pH: большинство белков будут элюированы при рН 6-4 (также при рН 3-4), а буфер может быть ацетат натрия, лимонная кислота и фосфатные буферные системы.
(2) Конкурентное элюирование: линейно увеличение или увеличение концентрации конкурирующих веществ с аффинностью к ионам металлов (например, 0-0,5 моль/л имидазол, 0-50 ммоль/L гистидин, 0-2 моль/л NH4Cl).
(3) Элюция хелатирующего агента: хелатирующие агенты, такие как EDTA и EGTA, могут реагировать с ионами металлов, чтобы вызвать элюирование белка. Однако этот метод не может разделить различные белки и влиять на адсорбцию белков, что приводит к неспособности висеть слитого белка.
Замечания:
(1) При первом использовании, если концентрация имидазола, необходимая для элюирования, является неопределенной, рекомендуется добавить 10 ммоль/л, 20 ммоль/л, 50 ммоль/л, 100моль/л, 200 ммоль/л, 500 ммоль/л до начальный буфер. Имидазол элюировали и собирали с низкого до высокого, соответственно, и элюированные результаты были идентифицированы с помощью электрофореза SDS-PAGE.
(2) Имидазол является щелочным, а рН регулируется HCl после получения соответствующего буфера.
(3) Понижение pH-элюирования и элюирование хелатирующего агента приведет к падению ионов металлов, а ионы металлов необходимо переоценить до следующего использования.
(4) Условно, линейное элюирование имидазола может быть выполнено для определения предпочтительных условий элюирования.
Для вышеупомянутых методов элюирования от 150 до 500 ммоль/л NaCl должны быть добавлены в буфер для устранения ионного обмена.
5. Регенерация
(1) Гель должен быть обезбочен и регенерирован после повторного использования или когда необходимо заменить ионы хелатированных металлов. Метод удаления никеля: сначала промыть колонку 5-10 объемами дистиллированной воды, затем промыть колонкой 5-10 объемами слоя от 100 ммоль/ л ЭДТА и, наконец, используйте от 2 до 3 слоя объемов от 0,5 моль/ л NaCl промывки. Остаточная ЭДТА.
(2) Колонна, используемая в течение нескольких раз, обычно должна быть очищена после удаления никеля. Метод очистки: отмените столбец 0,1 ~ 1,0 моль/л NaOH, сохраните его на скорости 50 см/ч в течение 1 ~ 2 ч, не только может удалить сильные примеси, но и удалить источник тепла.
(3) повторно хелатирование ионов металлов после очистки. Метод хелации: во -первых, колонка после удаления никеля полностью уравновешивается объемом от 2 до 5 слоев дистиллированной воды, а затем от 0,1 до 0,3 моль/л металлической соли используется для прохождения 5-10 объемов слоя до ионов металла хелата. Промойте с 5-10 объемами дистиллированной воды, чтобы удалить невоспитанные ионы металлов.
6.cip
(1) Удаление белков, адсорбированных ионным обменом: объемы от 2 до 3 слоя промывали обратно 2 моль/л раствора NaCl.
(2) Удаление сильных гидрофобных белков и липидов и т. Д.
(3) Удаление осажденного белка, гидрофобного белка: этап регенерации эталонного геля.
7. хранение
Герметизированный и хранить при 4 ~ 30 ° C (20% этанол в растворе для хранения), сухой, вентилируемый, чистый, не замороженный; Используемые столбцы хранятся в 4 ~ 8 ° C, 20% раствор этанола.

Осторожность:
(1) Образец и Ni Seplife®6ff (NTA) должны быть  Уравновешен с буфером элюирования  а затем перейдите в колонку хроматографии.
(2) Кровать из колонны должно быть плоским, без канавков и пузырьков воздуха, в противном случае его следует переустановить.
(3) При использовании убедитесь, что температура колонны и буфера одинакова, избегая генерации пузырьков в слое колонны и влияя на эффект очистки.
(4) Скорость потока должна строго контролироваться во время процесса элюирования и не слишком быстро.
(5) Во время нагрузки и всего процесса элюирования поверхности цилиндра предотвращается высыхание.