Буферный раствор

pH является важным фактором в работе ионообменной хроматографии, а стабилизация и изменение pH обычно достигаются с помощью буферных растворов, поэтому выбор буферного раствора является важным фактором, влияющим на разделение.

При выборе буферного раствора ключевыми факторами, влияющими не только на отделение целевого продукта от примесей, но и на выход продукта, являются pH и ионная сила. Выбор pH зависит от изоэлектрической точки, стабильности и растворимости целевого продукта, что необходимо не только для того, чтобы отделяемый материал представлял собой ион, способный к обмену, но и для поддержания его высокой активности. Также следует учитывать значение pK ионообменника.

Поскольку сам буфер заряжен, он также объединяется с  среда для ионообменной хроматографии Такое сочетание вызовет два вида помех: с одной стороны, снижение концентрации буфера, что приведет к уменьшению буферной емкости; с другой стороны, он будет обмениваться с разделительной средой, конкурируя с белком за обменную емкость среды. Поэтому при использовании анионообменных хроматографических носителей следует избегать использования отрицательно заряженных буферов, таких как фосфат. При использовании катионообменных хроматографических носителей следует избегать использования положительно заряженных буферов, таких как Трис.

В связи с различиями в типах разделительных сред, начальный процесс несколько отличается. В обычных условиях, при использовании анионообменной хроматографической среды, начальный буфер имеет pH выше изоэлектрической точки целевого белка на 0,5-1; при использовании катионообменного слоя, при анализе среды, начальный буфер имеет pH ниже изоэлектрической точки целевого белка на 0,5-1.