Буферный раствор

pH является важным фактором в работе ионообменной хроматографии, а стабилизация и изменение pH обычно достигаются с помощью буферов, поэтому выбор буфера является важным фактором, влияющим на разделение.

При выборе буфера pH и ионная сила являются двумя ключевыми факторами, которые влияют не только на отделение целевого продукта от примесей, но и на выход продукта. Выбранный pH зависит от изоэлектрической точки, стабильности и растворимости целевого продукта, не только для того, чтобы сделать отделенный материал ионом, который может быть обменен, но и для поддержания его высокой активности. Также следует учитывать значение pK ионообменника.

Поскольку сам буфер заряжен, он также объединяется с  среда для ионообменной хроматографии . Эта комбинация вызовет два вида помех, с одной стороны, снижение концентрации буфера, тем самым снижая буферную емкость; с другой стороны, он обменивается с разделительной средой, чтобы конкурировать с белком за обменную емкость среды. Поэтому при использовании анионообменных хроматографических сред избегайте использования отрицательно заряженных буферов, таких как фосфат. При использовании катионообменных хроматографических сред избегайте использования положительно заряженных буферов, таких как Трис.

Из-за разных типов разделительных сред начальный процесс немного отличается. При нормальных обстоятельствах, когда используется среда анионообменной хроматографии, начальный буфер выше изоэлектрической точки целевого белка на 0,5-1 pH; при использовании катионообменного слоя При анализе среды начальный буфер ниже изоэлектрической точки целевого белка на 0,5-1 pH.