Элюирование и регенерация

Когда хроматографическая среда исчерпана, ее следует элюировать. Основной принцип заключается в десорбции целевого продукта более активным ионом или группой. Разные сорбенты различаются по своей активности. Поэтому следует выбрать подходящий элюент для элюирования белка из  хроматографические среды .

Существует примерно три способа элюирования ионообменной хроматографии:
Один из них предназначен для одновременного элюирования. Элюентом является разбавленная кислота, щелочь или солевой раствор, а также может использоваться соответствующий органический растворитель, при этом в основном используется солевой раствор, а лекарственная форма выбирается в соответствии с природой целевого продукта и конечного продукта. Поскольку вещество, которое должно быть поглощено, часто не является одним видом, заряд каждого вещества различен, и прочность связи со средой различна. Даже если используется тот же элюент, легко заменяемое вещество будет вытекать из среды первым, и сила связи будет сильной. После того, как материал выгружен, при условии, что он собирается путем фракционирования, различные вещества могут быть разделены для получения относительно чистого продукта. Этот метод часто используется для разделения, когда производительность целевого продукта хорошо изучена, или для разделения аналитических видов.

Второй - это ступенчатое элюирование, т. е. элюирование с различными концентрациями солевого раствора. Разделительная среда В процессе обменной адсорбции адсорбируются различные белки. Если используются постоянные условия элюирования, иногда не удается должным образом разделить все компоненты, и необходимо изменить условия элюирования. Это может быть ступенчатое изменение, то есть для элюирования поэтапно используются разные элюенты или элюенты с разными значениями pH, и могут быть получены разные пики элюирования в соответствии с разными концентрациями элюентов и разной кислотностью. То есть концентрация соли может получить целевой белок, а разные концентрации соли могут получить разные целевые белки. Этот метод пошагового элюирования подходит для разделения белков известной природы, особенно для масштабного производства, прост в эксплуатации и прост в управлении.

Третий тип - это непрерывное градиентное элюирование, то есть изменение ионной силы или pH элюата в соответствии с определенным линейным изменением (обычно только в особом случае с использованием метода элюирования, который изменяет pH), в процессе градации элюента. В этом процессе различные белки заменяются один за другим для получения различных белковых компонентов, и в то же время белки, как правило, не имеют хвостов. Градиентное элюирование является наиболее часто используемым методом элюирования в ионообменной хроматографии, и это также метод элюирования с самой сильной элюирующей способностью, который подходит для элюирования аналогичных компонентов с аналогичными зарядовыми свойствами.

В процессе элюирования можно использовать как прямоточное, так и противоточное элюирование. Прямоточное элюирование также называется прямым элюированием, то есть направление потока элюента совпадает с направлением потока рабочей жидкости, а противоточное элюирование также называется Для обратного элюирования направление потока элюента противоположно направлению потока рабочей жидкости. Если исходная жидкость обменивается и адсорбируется сверху вниз через обменную колонку, концентрация адсорбата в верхнем слое обменной колонки выше, чем в нижнем слое, и обратная десорбция элюата снизу вверх может достичь цели элюирования более эффективно. Однако, поскольку операция обратного элюирования намного сложнее, чем прямого элюирования, она в основном основана на положительном элюировании.

Скорость потока элюента также влияет на разделение ионообменной хроматографии, и скорость элюирования обычно поддерживается постоянной. В целом, разрешение медленного элюирования лучше, чем разрешение быстрого элюирования, но скорость элюирования слишком медленная, что приведет к длительному времени разделения, побочным эффектам, таким как диффузия образца, уширение пика спектра и снижение разрешения, поэтому это зависит от фактической ситуации. Выберите подходящую скорость элюирования. Если пики элюирования относительно сконцентрированы в определенной области, вызывая перекрытие, диапазон градиента должен быть соответствующим образом уменьшен или скорость элюирования должна быть снижена для повышения разрешения. Если разрешение хорошее, но пик элюирования слишком широкий, скорость элюирования должна быть соответствующим образом увеличена.